菌种活化：在超净工作台中，无菌操作将实验室保存的菌种划线接种
到查氏平板培养基中，28℃下培养5-7天，进行菌种活化。活化好的菌种保存在冰箱中。
（2）斜面种子培养：在超净工作台中，无菌操作将活化好的菌种接入查氏斜面培养基中，在28℃下培养5-7天。
（3）液体种子培养：无菌条件下，取5ml无菌水倒入培养好的斜面种子试管中，用接种环刮下斜面孢子制成菌悬液，取5ml接入50ml的液体种子培养基中，在28℃、转速180r/min的条件下培养2天。
（4）菌种发酵培养：无菌条件下，以15%的接种量将种子液接入50ml的发酵培养基中，在28℃、转速180r/min的条件下培养7-9天。
（5）黑色素的提取：将发酵结束的发酵液进行过滤除去菌丝体，用一定浓度的HCl将滤液的pH调至2-3，静置过夜，离心，将得到的沉淀在50℃下烘干，即得到粗提取的黑色素。
（6）黑色素的纯化：将烘干后的黑色素依次用乙醇、乙酸乙酯、石油醚洗涤，再用蒸馏水洗涤二次，干燥后即为初步纯化的黑色素。
（7）黑色素理化性质的研究：对纯化后的黑色素进行一些理化性质的研究，溶解性，pH、温度、紫外线、日光、氧化剂、还原剂、
确定上述最佳碳源后，配置不同碳源浓度的发酵培养基，以15%的接种量将种子液接入各培养基中，在28℃，转速180r/min的条件下培养7天，观察发酵液的基本特征，发酵液经离心后取1ml上清液用蒸馏水稀释10倍，在415nm下测定各发酵液稀释液的吸光度，确定最佳碳源浓度。
以无氮查氏液体培养基作为对照，分别按1%的量加入蛋白胨、酵母膏、NaNO3、（NH4）2SO4、尿素配成不同氮源的发酵培养基，在28℃，转速180r/min的条件下培养7天，观察发酵液的基本特征，发酵液经离心后取1ml上清液用蒸馏水稀释10倍，在415nm下测定各发酵液稀释液的吸光度，确定最佳氮源。
确定上述最佳氮源后，配置不同氮源浓度的发酵培养基，以15%的接种量将种子液接入各培养基中，在28℃，转速180r/min的条件下培养7天，观察发酵液的基本特征，发酵液经离心后取1ml上清液用蒸馏水稀释10倍，在415nm下测定各发酵液稀释液的吸光度，确定最佳氮源浓度。


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