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乳酸菌的分离及其产GABA发酵条件的优化

作品编号:SWHX0132 开发环境: WORD全文:37页 论文字数:14000
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[TAGS:乳酸菌,分离,发酵 指数:]
本文从市售酸奶中分离到一株产GABA的乳酸菌,经形态学和生理生化鉴定,初步确认为德氏乳杆菌。探索比色法测定GABA浓度时,发现2%的苯酚浓度、2.08%的次氯酸钠浓度对实验测定有利。虽然此法适用于大量样品的检测,但容易受到溶液中游离氨的影响,对复杂成分检测GABA不准确。探索纸层析-分光光度法测定GABA浓度时,发现展开剂(正丁醇:冰醋酸:水)体积比为4:1:3、显色温度和时间分别为80℃,30min,在510nm处测定洗脱液波长时,对实验测定有利。经过pH、温度、接种量这3个单因素试验及正交优化后,发现在pH6.5,温度30℃,接种量7%时GABA产量为0.177 g/L,可以作为糙米生物转化产GABA的初步探索。
分别选择(正丁醇:冰醋酸:水)体积比为2:1:1、4:1:3、4:1:1这几个良好的配比来试验不同配比对GABA层析效果的影响。将滤纸按照层析缸大小来裁剪,本文所用层析缸为20×20cm,故滤纸高度15-20cm,宽度按要点的样品个数选择适当长度。在展开剂中加茚三酮4g/L,平衡约30min,再用毛细管分别点上标准液10g/L L-MSG,1g/L GABA,发酵液(3天,含10g/L L-MSG的MRS培养基)在10000r/min离心5min后点样,层析结束后,在90℃烘箱显色15min,取出观察显色斑点。点样过程注意保持滤纸干燥洁净,以免污染滤纸使结果有误差;取出观察显色斑点时,要注意开烘箱的一瞬间,烘箱中正丁醇和醋酸挥发气体对眼睛和呼吸道的影响。
(2)洗脱液最佳吸收波长的测定
用微样进量器吸取GABA标准液1μL点样,GABA标准液为20mg/ml,即点样GABA为20微克,展开剂配比为正丁醇:冰醋酸:水=4:1:3(V:V:V),加入茚三酮4g/L。90℃干燥15min,剪下标准液斑点放入玻璃试管中,加入5mL洗脱液(V0.1%硫酸铜∶V75%乙醇=2:38)洗脱30min后,分别在490,500,505,510,513,515,520,525,535nm处测吸光度,空白液为洗脱液。
(3)显色温度和时间的确定
用微样进量器吸取GABA标准液1μL点样,GABA标准液为20mg/ml,即点样GABA为20微克,展开剂配比为正丁醇:冰醋酸:水=4:1:3(V:V:V),加入茚三酮4g/L。层析结束后,分别在70、80、90℃下显色10、20、30、40min,剪下显色斑点洗脱比色测定OD510。

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