
核酸酶P1的初步分离纯化
作品编号:SWHX0353 开发环境: WORD全文:25页 论文字数:13000字 此核酸酶P1的初步分离纯化毕业设计完整版包含[论文] |
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该酶同时具有磷酸二酯酶和磷酸单酯酶的活力,可以专一性的水解RNA 、热变性的DNA 等的3′,5′- 磷酸二酯键而得到5′- 核苷酸,它是一种对单链底物专一的核酸内切酶,它对单链底物的水解速率要远远大于双链底物,既可以作用于RNA 和DNA ,又可以作用于寡核苷酸,对底物的碱基没有特异性,对热稳定,最适作用温度为70 ℃,最适作用p H 值为5. 0 。可以在p H 值6. 0 时,在4 ℃下保藏数周。
将目标菌种在无菌操作下,接至土豆培养基中,28℃下,活化三天。
无菌操作下,用生理盐水将已活化的目标菌种洗脱,再将含菌种的生理盐水转接至发酵培养基中,在温度28℃、转速220转/min下培养85小时。
对此酶的性质进行研究或欲将此酶用于核酸的结构研究,则需要制备较纯的酶制剂。纯化方法如下,所有操作均在4℃进行。
将发酵完的含有菌体的液体培养基用滤纸过滤,除去菌体,得到粗酶液835ml。
边搅拌边慢慢地向粗酶液中加入567.8g硫酸铵,最终达0.
凝胶过滤是利用具有一定口径范围的多孔凝胶的分子筛作用对生物大分子进行分离的层析技术。当样品随流动相经过由凝胶组成的固定相时,分子量大的物质不能扩散进入凝胶颗粒内部,于是随流动相流经颗粒之间的狭窄空隙,首先洗脱出层析柱;分子量小的物质可以扩散进入凝胶颗粒内部,比较大分子量物质流经的载面积宽,流动速度慢,而后被洗脱出来。这样分子量大和分子量小的物质便得以分离(图3-7)。即固定相的网孔对不同分子量的样品成分具有不同的阻滞作用,使之以不同的速度通过凝胶柱,从而达到分离的目的,凝胶过滤又因此得名“分子筛层析”和“凝胶排阻层析”。
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无菌操作下,用生理盐水将已活化的目标菌种洗脱,再将含菌种的生理盐水转接至发酵培养基中,在温度28℃、转速220转/min下培养85小时。
对此酶的性质进行研究或欲将此酶用于核酸的结构研究,则需要制备较纯的酶制剂。纯化方法如下,所有操作均在4℃进行。
将发酵完的含有菌体的液体培养基用滤纸过滤,除去菌体,得到粗酶液835ml。
边搅拌边慢慢地向粗酶液中加入567.8g硫酸铵,最终达0.
凝胶过滤是利用具有一定口径范围的多孔凝胶的分子筛作用对生物大分子进行分离的层析技术。当样品随流动相经过由凝胶组成的固定相时,分子量大的物质不能扩散进入凝胶颗粒内部,于是随流动相流经颗粒之间的狭窄空隙,首先洗脱出层析柱;分子量小的物质可以扩散进入凝胶颗粒内部,比较大分子量物质流经的载面积宽,流动速度慢,而后被洗脱出来。这样分子量大和分子量小的物质便得以分离(图3-7)。即固定相的网孔对不同分子量的样品成分具有不同的阻滞作用,使之以不同的速度通过凝胶柱,从而达到分离的目的,凝胶过滤又因此得名“分子筛层析”和“凝胶排阻层析”。
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