本文主要讲述从嗜热芽孢杆菌HD1发酵产生的粗酶液出发，通过(NH4)2SO4沉淀、DEAE阴离子交换树脂层析和Sephacryl S-400凝胶柱层析，得到纯化后的几丁质酶，该酶的相对分子质量为80.8KD，具有较好的pH稳定性和较高的酶活力。经过薄层层析对酶解产物的分析表明，此酶对底物几丁质的切割方式为内切且降解产物具有良好的水溶解性。
由图1可知，(NH4)2SO4饱和度在10%～40%时，沉淀物很少，酶活很低；饱和度从40%增加到70%时，沉淀物越来越多，酶活逐渐增大，在70%饱和度时沉淀物酶活力最高；高于70%时，沉淀物酶活力急剧下降。因此，甲壳素酶的最佳(NH4)2SO4盐析浓度为70%饱和度。实验时收集40%～80%范围的蛋白沉淀，以减少总活力的损失。
如图2所示，可见三个峰。一个峰较高，另外两个较峰较低。在这三个峰下洗脱液均有紫外吸收，说明有蛋白质被洗脱出来。分别收集该三个峰下面的洗脱液，分别与胶质几丁质在最适度温度下反应，并用DNS溶液加热显色，来找出具有几丁质酶活力的洗脱液，收集。结果显示在140ml-175ml处的洗脱液有酶活力。收集该时间段的洗脱液并保藏。
如图4所示，左边为标准蛋白电泳条带，共六个条带，自上而下依次是兔磷酸化酶B（97400）、牛血清蛋白（66200）、兔肌动蛋白（43000）、牛碳酸酐（31000）、胰蛋白酶抑制剂（20100）、鸡蛋清溶菌（14400）；右边条带为经两种不同色谱柱后的蛋白洗脱液，主要集中以一个条带。可见酶透析液经过离子交换层析和葡聚糖凝胶层析后，分离出了较纯的几丁质酶。
如图5所示，以标准蛋白相对分子量的对数（lgMr）为纵坐标，相对迁移距离为横坐标作图，得到标准曲线，然后根据样品蛋白的相对迁移距离，从标准曲线上查出几丁质酶的相对分子量为80.8KD。
如图7所示，从左至右分别为胶质几丁质、葡萄糖溶液、6h酶解液、12h酶解液、N-乙酰氨基葡萄糖、酶液。这个实验说明，硅胶板上所显示的点并不是酶液或者胶质几丁质里本来就含有的，而是由几丁质被酶水解后产生的小分子片段所形成的。另一方面，显色剂茚三酮溶液并没有使葡萄糖和N-乙酰氨基葡萄糖，是因为茚三酮只能与存在氨基基团的分子显色，而这两个物质恰恰没有氨基基团。几丁质是带乙酰基团的氨基葡萄糖聚合物，如果几丁质酶只水解糖苷键，形成小分子聚合物或者寡糖，茚三酮不能使其显色，而结果水解产物显色了。从这个结果可以推出，该发酵液中不仅水解了糖苷键，而且脱去了几丁质中存在的乙酰基团。这其中包含两种可能性：一,发酵液中含

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