分别选用了Neutrase、Alcalase2.4L、Promatex、Flavourzyme、Papain、Trypsin 六种蛋白酶水解贻贝粗蛋白,按各自的最适条件（见表2）及相同的酶与底物浓度比[E]/[S] (1.5:100, w/w) 进行水解,测定酶解产物的水解度、蛋白质回收率，以此评价酶解效果。
由于抗氧化活性的作用机制多种多样，抗氧化活性的评价也需要采用多种抗氧化体系[13]。并且，在本实验过程中，采用还原型的谷胱甘肽（GSH）作为已知的抗氧化剂进行对照，从而评价贻贝酶解物的抗氧化活性。
分别吸取已配制的不同浓度（0.0—1.6 mg/mL）的贻贝酶解物和GSH 的水溶液2.0 mL，与2.0 mL 2×10-4 mol/L DPPH 乙醇溶液混合，在暗室放置30 min后，取出，在514 nm(最大吸收波长处)测定其吸光度，以蒸馏水代替样品溶液作为控制。对DPPH自由基的清除能力的大小，表现为DPPH溶液在514nm 处的吸光度的降低，所有实验均重复三次，并采用以下方程计算清除率。清除率P可用下式计算：
 P=[1－（Ai－Aj）/AC] × 100%[14-15]
  式中: Ai = 2 mL DPPH溶液+2 mLGSH溶液的吸光度；
Aj = 2 mL GSH溶液+2 mL溶剂的吸光度；
AC = 2 mL DPPH溶液+2 mL溶剂的吸光度。
配制一系列浓度梯度（0.0—1.6mg/mL）的贻贝酶解物和GSH 的水溶液，分别取0.5 mL上述溶液于不同的试管中，再分别加入2.5 mL 1%铁氰化钾溶液，混匀后50℃水浴30min，然后加入2.5 mL 10%三氯乙酸（TCA）。从各混合物中取出上清液2.5 mL加入2.5mL蒸馏水及0.5mL 0.1%的三氯化铁溶液。充分混匀后在700 nm处测定其吸光度。吸光值越高，则样品的还原力越强，所有实验均平行测定三次。

与DPPH自由基体系和还原力体系的实验相比，在进行羟基自由基体系的实验时，遇到了一些困难，从多次的实验数据显示，但并非所有的实验条件都可以测出贻贝酶解物对羟基自由基良好的清除能力。我在实验过程中曾对实验条件进行过研究摸索：取8个烧杯，移取两份50 mL蒸馏水，分别加入1 mL甲基紫溶液（1 mmol/L），在调节PH=3.5后，编号1～8，在1～4烧杯和5～8烧杯里分别加入1、2、3、4 mL的1.6 mg/mL的GSH。在1～4烧杯里加入2 mLFeSO4(2 mmol/L)溶液和1.5mL H2O2 (3 mmol/L)，在5～8烧杯里，加入1.5 mL FeSO4(2 mmol/L)溶液和1mL H2O2 (3 mmol/L)，实验结果显示加1 mL GSH的吸光度比较小，2、3、4 mL的吸光度比较大，说明加入的毫升数增加，清除能力增加，但2、3、4 mL的清除能力差别不大，因此从环保的角度采用加入1.5 mL FeSO4(2 mmol/L)溶液和1mL H2O2 (3 mmol/L)进行实验为佳，且实验结果线性良好。
4.5贻贝酶解物对超氧自由基均有清除能力，而且清除能力......

目  录
中文摘要 I
英文摘要 II
目录 IV
1. 绪论 1
1.1 自由基代谢理论 1
1.2 自由基对生物机体的损伤及机制 1
    1.2.1自由基对脂质的损伤 1
    1.2.2 自由基对蛋白质的损伤 2
    1.2.3 自由基对糖类的损伤 2
1.3 自由基的清除及防御措施 3
1.4 抗氧化剂概述 4
1.5 体外评价抗氧化的方法 5
    1.5.1 DPPH自由基体系 5
1.5.2 还原能力的测定体系 5
1.5.3 羟自由基体系 5
1.5.4 邻苯三酚体系 6
1.6 实验背景 6
2. 实验部分  6
2.1 实验材料  6
2.2 实验试剂 7
2.3 实验仪器 7
2.4 实验方法 7
2.4.1 贻贝粗蛋白的制备 7
2.4.2基本成分测定 8
2.4.3 水解度(DH)的测定 8
2.4.4蛋白回收率的测定 8
2.4.5 贻贝粗蛋白酶解物的制备 8
2.4.5.1 整体流程 8
2.4.5.2 不同蛋白酶水解贻贝粗蛋白 8
2.4.5.3酶解物的抗氧化活性评价 8
2.4.6 酶解物对DPPH 自由基的测定 9
2.4.7 酶解物对还原力的测定 9
2.4.8 酶解物对羟基自由基的测定 9
2.4.9 酶解物对超氧自由基的测定 10
3 结果与讨论 10
3.1 基本成分分析 10
3.2 不同蛋白酶对贻贝粗蛋白的水解效果的比较 10
3.3 DPPH自由基体系 11
3.4 还原力的测定 12
3.5 羟基自由基体系 13
3.6 超氧自由基体系 14
4 结 论 15
4.1 实验结论 15
4.2 实验条件讨论 16
4.2.1贻贝酶解物对羟基自由实验条件的摸索 16
4.2.2贻贝酶解物对超氧自由实验条件的摸索 16
致    谢 17
参考文献 18