本实验以毛巾为载体，用戊二醛进行吸附交联固定脂肪酶，并利用固定化脂肪酶在非水相中催化正丁酸和乙醇的合成反应。研究了固定化过程中载体质量、酶加载量，反应体系中的时间、底物浓度及摩尔比、含水量、表面活性剂、储存和温度稳定性等因素对催化丁酸乙酯反应的影响规律，确定最优条件：在0.6g载体上固定脂肪酶0.1g／10ml为宜，在反应体系中乙醇和丁酸最适比例约为1:2，游离酶最适含水量为O.5％。表面活性剂中Tween60对酶活性的提升效果最为明显，另外，在时间、稳定性研究中对底物和产物的趋势亦作了讨论。由图4可知，随着酶量的逐渐升高，脂肪酶的酶活亦随之升高，由最初的0.43μmol∕min升至24.62μmol∕min；当酶量较少时，酯合成反应的酯化率急速上升，随着酶量的增多，酯化率趋势减缓，基本达到平衡。因此，从经济成本和酯化性能方面考虑，选择酶量为0.6g较为合适。
以0.6g毛巾为载体，分别固定不同质量的脂肪酶，在0.3mol/l的乙醇和正丁酸为底物，加环己烷为溶剂至10ml的三角瓶中，在25℃下反应1h，用气相仪测得产物含量，最后得出总酶活力和单位活力。结果如图5：
一元酸与一元醇反应生成酯，理论上为1∶1的反应。但由于酯化反应是可逆的，实际上，通常要加大一种底物的投料量来促使反应连续地向生成酯的方向进行。由上图可知，当丁酸的浓度不变时，产物丁酸乙酯的浓度随着乙醇浓度的增加而呈现出先上升后下降的趋势，其中当乙醇浓度为0.25mol/l时，产物丁酸乙酯的浓度最高；当乙醇的浓度不变时，产物丁酸乙酯的浓度随着丁酸浓度的增加而呈现出先上升后下降的趋势，其中当丁酸浓度为0.6mol/l时，产物丁酸乙酯的浓度最高。当乙醇和丁酸浓度分别为0.25mol/l和0.6mol/l时，产物丁酸乙酯的浓度达到最高点。因此，乙醇和丁酸的摩尔比以1:2为宜。通过研究，得到本实验脂肪酶的固定化以在28℃，0.6g载体上固定脂肪酶0.1g／10ml为宜，在反应体系中乙醇和丁酸最适比例约为1:2，游离酶最适含水量为O.5％，表面活性剂中Tween60对酶活性的提升效果最为明显，另外，随着时间的增长，底物的浓度逐渐减少而产物的浓度逐渐增加；在15天之内，固定化脂肪酶的酶活仍能保持住原来活性的80％以上；在4℃-37℃的温度范围内，固定化脂肪酶的酶活性良好。
通过这次的毕业设计，我

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