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山药多糖提取工艺正交优化

作品编号:SWHX0291 开发环境: WORD全文:23页 论文字数:11000
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本实验选用已加工处理后的山药饮片,为药店销售,符合国家药品标准。在使用前先将山药饮片初步粉碎,在恒温50℃烘干4h,再用碾钵粉碎至粉末,干燥待用。
(1)将粉碎的山药干片10g,加入95%的乙醇至少到80%以上,在90℃水浴中回流提取2h,间歇搅拌,以除去单糖及其它醇溶性成分。提取完毕,离心得提取液,残渣再用相同体积和浓度的乙醇提取一次(时间为2h),合并提取液,经3000r/min离心15min收集沉淀,上清液回收乙醇,沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、甲醇进行多次抽洗,挥散溶剂至干,置于真空干燥器中干燥保存,用于提取多糖。
(2)将乙醇回流提取过的残渣以1:20(影响因素1),提取温度60(影响因素2),提取时间为2h(影响因素3),恒温水浴,间歇搅拌,不同的提取次数(影响因素4),离心分离,上清液浓缩,加95%乙醇醇析,沉淀物用蒸馏水复溶后再加95%乙醇醇析(浓度同上),反复三次,将沉淀用无水乙醇、无水乙醚、丙酮各40mL洗涤以除去杂质,真空干燥,得山药水溶性多糖粗品。
(3)采用Sevage法去除蛋白。用少量双蒸水溶解粗多糖,混匀后按4:1的比例加入氯仿-正丁醇(5:1)混合液,振摇20 min,可见凝胶状的蛋白质析出,用离心法除去。
试剂配制:20g/L苯酚溶液,精密称取2g苯酚用蒸馏水定容至100mL。
测定:精密称取105℃干燥至恒重的山药多糖0.100g,蒸馏水溶解并定容100mL,从100mL中精密移取10mL,再次定容至100mL,此时终浓度为0.10g/mL。精密吸取溶液1.00于10mL具塞试管内,补充水至2.00mL,另取一支空管加入2.00mL蒸馏水做对照。每管各精密加入浓度为20g/L的苯酚溶液(新鲜配制)1mL,浓硫酸5mL,混匀,放置5min,沸水浴加热显色5min,冷水浴冷却30min,在485nm处测定吸光度,重复测3次,取3次平均值进行以下计算 。
乙醇的回流处理可以除去一些溶于醇的物质,而山药多糖不溶于乙醇,更重要的是经过乙醇回流处理的山药粉,其中的淀粉有一定的变性,使易糊化的支链淀粉断链变成直链淀粉而不易糊化,有利于下面的水提过滤分离。从表1结果可以确定乙醇预处理的时间采用2+2h。


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