精密称取芦丁标准品20.0mg，加无水乙醇溶解后定容到100.0ml。分别准确移取上述溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml；然后各加5%的NaNO2 1.0ml，静置6min；再各加10%Al(NO3)3溶液1.0ml，静置6min；最后各加1mol/LNaOH溶液10.0ml，并以水定容至刻度。在510nm 波长下，以试剂空白为参比，测定不同浓度芦丁溶液的吸光度A。对A与芦丁浓度C（ug/ml）进行线性回归处理，当芦丁浓度在8-48 ug/ml范围内时，线性回归方程为：A=0.0121C-0.0019，R2=0.9999。以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标进行回归，绘制标准曲线。如下图1
在20g样品中，分别加入200ml不同浓度的乙醇，60℃恒温水浴中，提取2小时后，抽虑，旋转蒸发，最后将溶液定容至50ml，在510nm下测其吸光度A值。得出图2，总黄酮提取率与乙醇浓度之间的关系。
从图中的曲线趋势可以明显看出乙醇的提取效果以80％左右的浓度最好，随着乙醇浓度的增加，总黄酮的提取率先上升然后在80％左右达到最高，而后下降。结合图2，因此确定乙醇浓度在60％-90％之间比较合适。
在20g的样品中，加入200ml的80％乙醇，分别在30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃恒温水浴中，提取2小时后，抽虑，旋转蒸发，最后将溶液定容至50ml，在510nm下测其吸光度A值，得出图3，总黄酮提取率与提取水浴温度的关系。
从图中的曲线趋势可以明显看出提取率随着提取温度的增加也不断的提高，然后也随之下降，但是温度过高会将其中的活性成分易被破坏，杂质的溶出量增加，给提纯带来不便，成本加大，也造成溶剂损失。所以综合各方面因素考虑，提取温度在50℃-80℃之间会比较适合。
在20g样品中，分别加入100ml、150ml、 200ml、300ml 80％乙醇，60℃恒温水浴中，取2小时后，抽虑，旋转蒸发，最后将，溶液定容至50ml，在510nm下测其吸光度A值，得出图4，总黄酮提取率与料液比的关系。


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