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板栗壳多糖的纯化及组成分析
| 作品编号:SWHX0339 开发环境: WORD全文:23页 论文字数:7000字 此板栗壳多糖的纯化及组成分析毕业设计完整版包含[论文] |
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目前,国内对板栗壳的研究主要集中在对板栗壳色素的抑菌效果和抗氧化作用上,对板栗壳多糖的研究还没有文献报道,而多糖是一类具有多种生物活性的高分子化合物,在之前的抗氧化试验中,采用Fenton法证明板栗壳粗多糖具有一定的清除羟基自由基的能力。同时鉴于板栗壳资源的闲置,在前人试验的基础上,本实验以板栗壳为原料,采用已建立了板栗壳多糖的提取工艺提取板栗壳粗多糖,对得到的板栗壳粗多糖进行了初步的分离纯化研究和单糖组成分析,以期为以后板栗壳多糖的深入研究提供一定的理论基础。
称取多糖样品2mg加入4mL三氟乙酸(2mol/L)于密封的试管中,100℃水解5h,水解液减压浓缩至干以除尽三氟乙酸(蒸馏水作为辅助)。然后加入0.1%NaOH (3mL)和6 mg NaBH4,密封放置过夜。在反应液中加入2滴醋酸分解过量的NaBH4,减压蒸干,依次用1:100(v/v)的盐酸–甲醇溶液和甲醇溶液反复冲洗4次,减压蒸干以除去硼酸根。产物加入2mL1:1(v/v)的吡啶–乙酸酐,密封,室温反应6h,超声20min,减压浓缩除去乙酸酐和部分吡啶,残留物用1mLCH2Cl2萃取,取20μL上清液进行GC-MS分析。GC-MS采用HP-5毛细管柱(30m×0.32mm),电离能70eV,离子源温度200℃。
称取标准单糖样品5mg,加入2mL1:1(v/v)的吡啶–乙酸酐,密封,室温反应6h,超声20 min,减压浓缩除去乙酸酐和部分吡啶,残留物用1mLCH2Cl2萃取,取20μL上清液进行GC-MS分析。GC-MS采用HP-5毛细管柱(30m×0.32mm),电离能70eV,离子源温度200ºC。
中至少含有两个及以上的组分,分别合并收集峰形对称的试管内的液体,经旋转蒸发,透析,冻干后得多糖组分cnps2,cnps3。
对cnps1- cnps3的纯度验证可通过更换层析柱类型,或采用GPC等方法检测后确定。
采用2.3.5所述方法,对板栗壳粗多糖进行水解、衍生化处理后,采用GC-MS仪进行检测,得到以下的检测结果。
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称取多糖样品2mg加入4mL三氟乙酸(2mol/L)于密封的试管中,100℃水解5h,水解液减压浓缩至干以除尽三氟乙酸(蒸馏水作为辅助)。然后加入0.1%NaOH (3mL)和6 mg NaBH4,密封放置过夜。在反应液中加入2滴醋酸分解过量的NaBH4,减压蒸干,依次用1:100(v/v)的盐酸–甲醇溶液和甲醇溶液反复冲洗4次,减压蒸干以除去硼酸根。产物加入2mL1:1(v/v)的吡啶–乙酸酐,密封,室温反应6h,超声20min,减压浓缩除去乙酸酐和部分吡啶,残留物用1mLCH2Cl2萃取,取20μL上清液进行GC-MS分析。GC-MS采用HP-5毛细管柱(30m×0.32mm),电离能70eV,离子源温度200℃。
称取标准单糖样品5mg,加入2mL1:1(v/v)的吡啶–乙酸酐,密封,室温反应6h,超声20 min,减压浓缩除去乙酸酐和部分吡啶,残留物用1mLCH2Cl2萃取,取20μL上清液进行GC-MS分析。GC-MS采用HP-5毛细管柱(30m×0.32mm),电离能70eV,离子源温度200ºC。
中至少含有两个及以上的组分,分别合并收集峰形对称的试管内的液体,经旋转蒸发,透析,冻干后得多糖组分cnps2,cnps3。
对cnps1- cnps3的纯度验证可通过更换层析柱类型,或采用GPC等方法检测后确定。
采用2.3.5所述方法,对板栗壳粗多糖进行水解、衍生化处理后,采用GC-MS仪进行检测,得到以下的检测结果。
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