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一种微生物源性抗菌蛋白的提取

作品编号:SWHX0101 开发环境: WORD全文:16页 论文字数:6200
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[TAGS:微生物,抗菌蛋白 指数:]
发酵过程中对发酵液涂片发现:发酵24h菌体细长,多个细胞串生,呈丝状;发酵48h菌体变粗,仍为多个串生,但串生个体减少,呈棍状;发酵72h菌体粗短,单体或双体存在,芽孢染色表明没有芽孢产生;发酵96h菌体短小,单体存在,芽孢染色看见有芽孢产生。同时对取出的发酵液进行拮抗活性检测,检测结果如图3.1所示。
经过发酵液的分级盐析后,对不同饱和度硫酸铵盐析所得蛋白拮抗活性检测结果如图3.1所示,发酵液中的有效物质可以为硫酸铵沉淀出来。随着硫酸铵饱和读的增大,有效物质的沉淀量逐步增大,达到60%的饱和度时,有效物质获得最多;继续增大饱和度,有效物质的析出量逐步减少。因此
可以确定有效成分的盐析饱和度为60%。
在含有蛋白质的滤纸片周围有抑菌圈形成,在含有生理盐水的滤纸片周围无抑菌圈形成,各抑菌圈大小分别为1.3cm,1.1cm,1.2cm,1.3cm,1.4cm和1.2cm。对抑菌圈周围黑曲霉菌丝观察发现菌丝顶端膨大,菌丝变形,细胞破裂。
抗菌蛋白经紫外线照射处理8小时后,其抑菌活性基本不变。说明该抗菌蛋白对紫外线不敏感,有较强的抗紫外线能力。
本文对枯草芽孢杆菌发酵研究表明,菌体产生拮抗物质的过程同菌体的生长呈正相关系。菌体培养72小时后停止生长分裂,此时所产生的有效物质的量也达到最大值,继续发酵的意义不大。
关于防病细菌抗菌蛋白的初步纯化,目前普遍是采用硫酸铵盐析的方法。但另外也可以采用浓盐酸沉淀和超滤的方法。
由于本文中抗菌物质的分离是按照蛋白质的特性,通过硫酸铵盐析和透析袋透析进行分离纯化的,抗菌蛋白只得到初步纯化,不排除该菌同时产生其他非蛋白物质的可能性。因此,本文中粗提物的一些理化性质仅作为一般参考。另外,对于所得的抗菌蛋白,仅进行了拮抗活性检测及部分理化性质的研究。
要得到较纯的蛋白,可以通过柱层析、离子交换层析进一步纯化。如要达到能测定氨基酸序列的要求,则还需要在此基础上进一步采用高压液相色谱等方法对蛋白进行再纯化。

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