本论文通过对出发菌株运动酵母单胞菌进行耐酸性试验使其能在酸度较高的环境中存活，然后对耐酸性试验得到的耐高酸菌株进行物理化学诱变，如紫外-EMS（甲基磺酸乙酯）联合诱变，加热诱变，紫外-NTG（亚硝基胍）联合诱变，并利用TTC加层平板法和CM,MM平板法筛选到一株高产的丙酮酸菌株。然后对筛选得到的高产菌株进行摇瓶发酵，并利用HPLC法，2，4-二硝基苯肼法，硝酸铁法测得发酵液中丙酮酸的含量。
配制诱变前处理液：称取8.5g Nacl 加入去离子水至1000ml（tap-water）包扎灭菌，室温备用。取上述溶液100ml，加入0.5g Y.E，加入100μl吐温，包扎灭菌。即成诱变前处理液。
实验用品准备：取100μl-1000μl移液枪，10μl-100μl移液枪，及对应枪头，包扎。取100mltap-water置于锥形瓶中。取玻璃珠少量置于锥形瓶中，使其能铺满锥形瓶底部。取100个培养皿，洗净，烘干，用报纸包扎。取4个50ml离心管，放置于烧杯中，包扎。取若干1ml离心管，装满烧杯。取20根试管，包扎。将上述物品包扎，于121℃ 0.1MPa 20min灭菌，备用。
配制948固体培养基1L，121℃ 0.1MPa 20min灭菌后，趁热于超净台中倒平板（待培养基中培养皿中凝固后，再盖上盖子），将平板置于超净台中备用。
配制948液体培养基200ml,灭菌，备用。
在超净台中，取100μl菌液（耐酸性实验保藏菌种）接种到948液体培养基中，放置于180rpm,30℃摇床过夜。
(2) 诱变步骤
将超净台开启，用紫外灯照射20min杀菌，完成后通风。
取出在摇床过夜的含有原始菌种的锥形瓶，在超净台将其分装于50ml离心管中，并使离心管中的液体等高，且用天枰平衡。将离心管放入离心机中，5000rpm，离心8min。
离心完成后，在超净台中将离心管中的上清液倒去，加入配制好的诱变前处理液，震荡使其完全溶解，再将离心管内的液体倒入装有玻璃珠的锥形瓶中（即弹子瓶），戴好手套，用移液枪小心移取

本生物化学毕业设计“丙酮酸高产菌株的选育”论文由清风毕业设计网[www.lunwen550.com]征集整理！