
牛乳中假单胞菌属的PCR快速检测
作品编号:SWHX0427 开发环境: WORD全文:29页 论文字数:10600字 此牛乳中假单胞菌属的PCR快速检测毕业设计完整版包含[论文] |
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综合分析整个实验过程记录,得出以下结论:
菌株的生化代谢特征与相关文献中所报道的嗜冷菌假单胞菌属的生化特性一致。
VP测定加入试剂后,没有立刻有颜色变化,需要放置长时间才会出现红色反应。
吲哚实验总,若颜色不明显,可以加4-5滴乙醚至培养液,摇动,使乙醚分散于液体中,将培养液静置片刻,加入吲哚试剂。如培养液中有吲哚时,吲哚可被提取在乙醚层中,浓缩的吲哚和试剂反应,颜色会更明显。
DNA的提取采用了两种不同的方法,通过电泳图相比较得知,试剂盒法提取的DNA浓度较高,没有RNA残留物,比较干净。CTAB法提取的DNA浓度相比试剂盒法所提取的DNA浓度低,而且电泳条末端有白色区域,说明还有残留的RNA,但是这些残留的RNA对PCR产物的回收测序是没有影响的。
PCR的操作必须在超净工作台上进行,且要避免样品间的相互污染。本次试验的引物是原核细菌通用的引物,不是根据假单胞菌属所特定设计的一段特定引物,所以本次试验的重点就是设置不同的PCR退火温度来达到实验结果。
理想状态下,实验要求退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火,但同时还要足够高,以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的 Tm低5℃。因为本次实验的引物不是特定引物,所有本次试验设置了42℃、54℃、56℃、58℃的不同的退火温度来进行试验,42℃、54℃的退火温度后,凝胶电泳图上没有任何特异性条带和非特异性条带,56℃退火温度时凝胶电泳图上出现非特异性条带,最后设置58℃退火温度后,凝胶电泳图上出现特异性条带,实验完成。
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菌株的生化代谢特征与相关文献中所报道的嗜冷菌假单胞菌属的生化特性一致。
VP测定加入试剂后,没有立刻有颜色变化,需要放置长时间才会出现红色反应。
吲哚实验总,若颜色不明显,可以加4-5滴乙醚至培养液,摇动,使乙醚分散于液体中,将培养液静置片刻,加入吲哚试剂。如培养液中有吲哚时,吲哚可被提取在乙醚层中,浓缩的吲哚和试剂反应,颜色会更明显。
DNA的提取采用了两种不同的方法,通过电泳图相比较得知,试剂盒法提取的DNA浓度较高,没有RNA残留物,比较干净。CTAB法提取的DNA浓度相比试剂盒法所提取的DNA浓度低,而且电泳条末端有白色区域,说明还有残留的RNA,但是这些残留的RNA对PCR产物的回收测序是没有影响的。
PCR的操作必须在超净工作台上进行,且要避免样品间的相互污染。本次试验的引物是原核细菌通用的引物,不是根据假单胞菌属所特定设计的一段特定引物,所以本次试验的重点就是设置不同的PCR退火温度来达到实验结果。
理想状态下,实验要求退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火,但同时还要足够高,以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的 Tm低5℃。因为本次实验的引物不是特定引物,所有本次试验设置了42℃、54℃、56℃、58℃的不同的退火温度来进行试验,42℃、54℃的退火温度后,凝胶电泳图上没有任何特异性条带和非特异性条带,56℃退火温度时凝胶电泳图上出现非特异性条带,最后设置58℃退火温度后,凝胶电泳图上出现特异性条带,实验完成。
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