测定的基础是抗原抗体反应，微孔板包被有针对氯霉素的抗体，加入氯霉素标准或样品溶液和氯霉素酶标记物，游离的氯霉素与氯霉素酶标记物竞争氯霉素抗体（竞争性酶联免疫法）。没有结合的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质发色剂加入到孔中。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝色转变为黄色。在450nm测量，吸光强度与样品中的浓度成反比。
取出44个微孔板，每个标准品和样品需做两组做对照平行。将6个标准品和16个样品取50ul/孔按顺序加入微孔中，再加入50ul/孔稀释的酶标记物到微孔底部，用手将轻轻摇动微孔板混合，在室温（20-25℃）下遮光孵育1h。倒出孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打除去孔中的液体，向孔中加入250ul洗涤缓冲液，再次倒出孔中的液体，完全除去孔中的液体，再重复操作洗涤步骤两次以上。加入100ul发色剂到微孔中，用手轻轻摇动微孔板混合，在室温（20-25℃）下暗处孵育15分钟。加入100ul反应终止液到微孔中，用手轻轻摇动微孔板混合，在450nm处测量吸光度值，必须在加入终止液后30分钟内读取光度值。
3、注意事项
氯霉素酶标记物为浓缩液，由于稀释的酶标记物稳定性不好，所以只稀释实际需用量的酶标记物。在吸取浓缩液之前，要仔细轻轻振摇。用缓冲液以1:10(1+10)的比例稀释酶标记物浓缩液。
实验前准备将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出微孔后，将不用的微孔板放入自封袋，注意挤出袋中的空气，防止未使用的微孔过多接触水汽，保存于2-8℃。洗板过程注意根据试剂盒推荐的洗板步骤进行操作，试验过程中不要让板孔干燥。洗涤缓冲液为PBS-tween缓冲液。将试剂盒中的洗涤缓冲盐完全用1L的蒸馏水溶解，配制好的洗涤缓冲液在2-8℃下大约保存4-6周。
从实验中得出，16号对照组中得出氯霉素含量浓度为212.18ppt。所以得到本次实验克伦特罗的回收率为106.09%。此次实验回收率超过100，原因是由于16号猪肉样品中本身含有一定量的氯霉素，仍属正常范围。由此可见，此次实验总体比较成功，其结果仍具有可信性。
呋喃硝基类药物的主要功能基团一致，其前处理一样。由于其在体内很快就能被代谢，而在组织中结合的代谢产物则能存留