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α-淀粉酶固定化的研究

作品编号:SWHX0090 开发环境: WORD全文:20页 论文字数:8300
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α-淀粉酶是应用广泛的一种酶。固定化α-淀粉酶显示出良好的应用前景[6]。吸附法是最古老的固定化方法,操作简单,经济上最具吸引力[7],使用的载体有无机载体和有机载体,聚苯乙烯阴离子交换树脂是一种常用的固定化载体,它有较好的机械强度,对热和化学物质比较稳定,有很好的再生能力,有较大的表面积,同时廉价易得[8]。
本文以聚苯乙烯阴离子交换树脂作载体,采用吸附法固定α-淀粉酶,并对其条件进行优选。而后以戊二醛为交联剂,将吸附法和吸附交联法进行比较。
称取酶粉1~2g,先用少量的磷酸缓冲液溶解,并用玻璃搅拌棒捣研,将上清液小心倾入容量瓶中,再加少量缓冲液,如此捣研3~4次,全部移入容量瓶中,至刻度,摇匀。通过四层纱布过滤,滤液供测定用。(磷酸缓冲液pH=6.0的配制 称取Na2HPO•12H2O 45.23g、柠檬酸8.07g,用水溶解并定容至1000mL。配好后用pH计校正)
吸取可溶性淀粉液20mL于试管中,加入缓冲液5mL,摇匀后,于60±0.2℃恒温水浴中预热5分钟。再加入稀释好的酶液1mL,立即计时,摇匀,准确反应分钟。
立即吸取反应液1.00mL于稀碘液5.00u/mL中,摇匀,并以稀碘液作空白,于660nm波长下,用10mm比色皿,迅速测定其吸光度(A)。根据其吸光度查附表1,得酶液的浓度(C),再求得测试酶液的酶活力。
取处理过的载体5份,加入5ml酶液,于6℃下吸附20小时,然后加入4%戊二醛于6℃下交联,交联时间分别取2、4、6、8、10小时。测固定化酶的相对活力,结果如下(表5、图5)。随着交联时间的延长,固定化酶活力增加;交联时间为8 小时。酶活力最高;时间过长,交联反而使酶活力下降。
1.聚苯乙烯阴离子交换树脂吸附法固定α-淀粉酶的最佳条件为:酶浓度l0mg/ml,吸附时间16小时,吸附温度6~9℃,介质pH6.8。
2.聚苯乙烯阴离子交换树脂交联法固定α-淀粉酶的最佳条件为:吸附时间20小时,吸附温度6~9℃,介质pH6.8,交联温度6~9℃,交联时间8小

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