本文应用分子生物学PCR扩增技术、PCR产物纯化及连接插入载体（pUC）技术、制备感受态细胞技术、外源DNA转化技术、质粒提取技术、DNA测序技术、原核表达技术等开发抗TNF-α Fab小分子抗体药物，治疗与TNF-α作用相关的疾病。
本实验用的受体菌株是大肠杆菌Top10F’菌株，采用的方法是CaCl2法。具体步骤如下：将新鲜大肠杆菌E.coli TOP10培养物接种于5ml LB培养基，37℃过夜振荡培养，次日早上将过夜培养物按1％的接种量转接于含有50ml LB培养基的三角瓶中，37℃振荡培养至OD600=0.3～0.5（约2h），取出培养物，冰浴5min，4℃5000rpm离心5min；去上清液，菌体用10ml冰浴的0.1M CaCl2溶液充分重悬，冰浴30min；4℃5000rpm离心5min，去上清液，菌体用适量冰浴的0.1M CaCl2溶液重悬，分装于1.5ml离心管，4℃保存备用
本实验用的是常规聚丙烯酰胺凝胶电泳（conventional polyacryamide gel electrophoresis），它是根据蛋白质分子在缓冲液中的大小、形状以及带电的多少，在恒定pH缓冲系统中的分离，主要用于检测样品纯度和测定蛋白分子质量。
在蛋白质电泳前，需经超声破碎法破细胞壁使蛋白质释放出来，声频为15-20 kHz 的超声波在高强度声能输入下可以进行细胞充分破碎。之后送样蛋白质电泳检测（15%SDS－PAGE）。
本实验进行了多次PCR扩增，根据前人的研究经验，在DNA扩增时主要受到DNA 浓度，dNTP浓度，Mg2+浓度等因素的影响。在实验中对三者的含量也进行了多次试验。模板DNA用量大多在0.1～10 ng/μL之间，以20μL反应体积为例,大多采用10～100 ng[12]。本试验采用的模板DNA浓度为50ng/μL，扩增时用量1μL，相当于50ng；dNTP浓度变化对DNA的扩增结果影响不大，其浓度大多稳定在0.1～0. 2 mmol/ L之间[13]。若浓度太高则容易拖尾，识别并去除错配碱基的机会下降，导致错误率升高；

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