（1）在血液中，由于Cu/Zn-SOD与血红蛋白等共存于血红细胞，所以通过离心分离血浆和血细胞，并收集血细胞，再通过搅拌使血细胞破壁溶血。溶血后，用氯仿-乙醇处理溶血液，使血红蛋白沉淀，而Cu/Zn-SOD则留在水-乙醇均相溶液中。
（2）因为磷酸氢二钾极易溶于水，而在乙醇中的溶解度甚低，将磷酸氢二钾加入水-乙醇均相溶液中时，溶液明显分层，上层是具有Cu/Zn-SOD活性的含水乙醇相，下层则是溶解大部分磷酸氢二钾的水相（比重大）。用分液漏斗处理，收集上层具有Cu/Zn-SOD活性的含水乙醇相。
（3）选用有机溶剂丙酮沉淀Cu/Zn-SOD，因为Cu/Zn-SOD对丙酮不敏感，而极性有机溶剂能引起蛋白质脱去水化层，并降低介电常数而增加带电质点间的相互作用，致使蛋白质颗粒凝集而沉淀。但采用这种方法沉淀蛋白质时，需在低温下操作，并且尽可能缩短处理时间，从而避免蛋白质变性[4]。
（4）由于Cu/Zn-SOD对热稳定性较好，根据文献记载天然牛血Cu/Zn-SOD在75℃下加热数分钟，其酶活力丧失很少因此选用热处理来除去易热变性的杂蛋白[12]。
（5）而Cu/Zn-SOD的pI为4.95，丙酮沉淀后的沉淀溶解液在pH 7.6的buffer（2.5mM PBS＋0.1mM EDTA）中透析后，Cu/Zn-SOD带负电，过DEAE-Sepharose Fast Flow 阴离子交换柱可得到进一步纯化。
（3）将所需K2HPO4•3H2O加入上清液时，应缓慢少量的加，切勿把它一次性全部加入，这样会使大量K2HPO4•3H2O在底部结块，且也难溶解于上清中，不易分层。
（4）丙酮沉淀时间不能太长，不然会使大量杂蛋白也混合沉淀出来，导致蛋白浓度增加，而比活力下降，从而影响分离提纯的结果。
（5）在装柱前，DEAE-Sepharose Fast Flow 填料应在循环真空泵上抽真空，除去填料内的气泡。在装柱时，填料应缓慢沿玻棒贴壁加入柱内，等填料均匀的沉降后，用pH 7.6的buffer（2.5mM PBS＋0.1mM EDTA）平衡过液。
（6）冻干SOD时，应在冻干液中加1﹪的甘露醇作为保护剂，防止SOD在冻干过程中失活。


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