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土曲霉lovastatin高产菌的基因组重排育种

作品编号:SWHX0250 开发环境: WORD全文:29页 论文字数:13000
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本文将一种较新的育种方式基因组重排用于土曲霉菌种的选育,以提高其洛伐他汀的产量。初步探讨了耐前体和耐自身代谢产物突变株的筛选方法,对土曲霉原生质体的制备条件进行了研究,考察了菌体菌龄、酶种类、酶浓度等对土曲霉原生质体制备的影响。用紫外线灭活和热灭活对原生质体进行了灭活并初步进行了基因组重排实验。经过两轮基因组重排实验初步获得了具有潜在高产性能的10株抗性菌株(其中耐乙酸钠前体的抗性菌株6株,耐Lovastatin的抗性菌株4株)。
术可以用来改造细菌的基因组,实现表型的改良。基因组重排技术与经典的杂交育种技术有一定的相似性,但经典杂交育种在每一代只有两个亲本进行重组,而重排技术则具有多亲本杂交的优势。对细菌群体进行重复的基因组重排可以有效构建新菌株的组合文库。如果将它应用到带表型筛选的细菌群体中,就会产生很多表型又显著改良的新菌株。
基因组重排技术通过传统诱变与细胞融合技术相结合,对微生物细胞进行基因组重排,从而大幅度提高微生物细胞的正向突变频率及正向突变速度,使人们能够快速选育出高效的正向突变菌株。基因组重排技术在微生物遗传性状改变上的优点己经充分地显示出其在微生物育种上的应用价值。在对微生物遗传特性洁未完全掌握的今天,基因组重排技术在无需了解微生物遗传性状的条件
(1)研究土曲霉原生质体制备的影响条件,考察菌体菌龄、酶种类、酶浓度对土曲霉原生质的影响。根据实验的结果可以确定,菌体培养36 h后,用1.5%的蜗牛酶,酶解4 h是最佳的原生质体制备条件。
(2)根据实验结果,建立耐合成前体(乙酸钠)和耐自身代谢产物(lovastatin)的平板初筛方法。12.0%的乙酸钠浓度和1.0g/L的 lovastatin浓度作为抗性平板的完全抑菌浓度。

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