
农杆菌介导转录因子CBF转化甘蓝型油菜
作品编号:SWHX0162 开发环境: WORD全文:24页 论文字数:10000字 此农杆菌介导转录因子CBF转化甘蓝型油菜毕业设计完整版包含[论文] |
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试验以成熟油菜“超油2号”种子培养出的下胚轴愈伤组织为受体材料,运用农杆菌介导法将转录因子CBF基因导入供试品种的基因组中,得到的油菜植株经PCR检测,Southern杂交验证分析,获得转基因植株60株,转化频率为1.2%。已转入目的基因植株的耐逆性的鉴定正在准备之中。
拟南芥CBF1、CBF2和CBF3转录激活因子分别包含213、216和216个氨基酸,推导的分子量均在24KD左右,等电点(pI)较低,CBF2和CBF3各为5.0和4.9。CBF转录激活因子一级结构中含有AP2 DNA结合域、推断的碱性核定位信号区核潜在的酸性转录激活域[16]。AP2 DNA结构域为植物所特有,它由大约60个氨基酸残基组成,在不同植物中非常保守[17]。推断的碱性核定位信号区位于N-末端区域,富含精氨酸核赖氨酸残基,CBF转录激活因子进入细胞核的过程受该区域的控制。位于C-末端的潜在转录激活区酸性氨基酸含量较高,其pI在3.6~3.8之间,这一区域被认为在转录激活中起主导作用[17]。
在CBF1、CBF2和CBF3转录激活因子中均发现由蛋白激酶C和酪蛋白激酶Ⅱ的潜在识别位点,若干这些位点在3种CBF蛋白中是保守的,如丝氨酸-13、丝氨酸-56、苏氨酸-151等,其中前二者位于AP2 DNA结合域内[18]。一些研究结果表明,转译后的蛋白磷酸化修饰作用能增强植物中的转录因子域DNA结合能力[18]。Medina等[19]据此推测,CBF蛋白中存在的潜在磷酸化位点可能在它们的生理功能中起重要作用。
用SDS法提取转基因油菜植株基因组DNA后,使用CBF1-3’和CBF1-5’为引物进行PCR扩增并经过琼脂糖凝胶电泳的检测[22]后,结果显示(图6):当使用CBF引物时,作为阳性对照的CBF质粒和植株1、3~12均扩增出一条介于500~750bp之间的特异条带。而作为阴性对照的非转基因植株CK没有扩增出特异性条带。
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拟南芥CBF1、CBF2和CBF3转录激活因子分别包含213、216和216个氨基酸,推导的分子量均在24KD左右,等电点(pI)较低,CBF2和CBF3各为5.0和4.9。CBF转录激活因子一级结构中含有AP2 DNA结合域、推断的碱性核定位信号区核潜在的酸性转录激活域[16]。AP2 DNA结构域为植物所特有,它由大约60个氨基酸残基组成,在不同植物中非常保守[17]。推断的碱性核定位信号区位于N-末端区域,富含精氨酸核赖氨酸残基,CBF转录激活因子进入细胞核的过程受该区域的控制。位于C-末端的潜在转录激活区酸性氨基酸含量较高,其pI在3.6~3.8之间,这一区域被认为在转录激活中起主导作用[17]。
在CBF1、CBF2和CBF3转录激活因子中均发现由蛋白激酶C和酪蛋白激酶Ⅱ的潜在识别位点,若干这些位点在3种CBF蛋白中是保守的,如丝氨酸-13、丝氨酸-56、苏氨酸-151等,其中前二者位于AP2 DNA结合域内[18]。一些研究结果表明,转译后的蛋白磷酸化修饰作用能增强植物中的转录因子域DNA结合能力[18]。Medina等[19]据此推测,CBF蛋白中存在的潜在磷酸化位点可能在它们的生理功能中起重要作用。
用SDS法提取转基因油菜植株基因组DNA后,使用CBF1-3’和CBF1-5’为引物进行PCR扩增并经过琼脂糖凝胶电泳的检测[22]后,结果显示(图6):当使用CBF引物时,作为阳性对照的CBF质粒和植株1、3~12均扩增出一条介于500~750bp之间的特异条带。而作为阴性对照的非转基因植株CK没有扩增出特异性条带。
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