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稻曲病菌遗传多样性的初步分析

作品编号:SWHX0481 开发环境: WORD全文:24页 论文字数:9800
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[TAGS:稻曲病菌,遗传多样性 指数:]
初浸染源是菌核还是厚垣孢子或者以哪种为主,再浸染源研究几近空白。稻曲病繁殖体在浸染循环中作用及主要浸染期和浸染点都不太确定,有待研究。
稻曲病菌粗毒素含有的化学组分及这些组分在病菌浸染过程中的作用机制有待进一步探明。
采用分子遗传技术,发掘并克隆稻曲病致病相关基因,系统研究水稻对稻曲病的致病机制。
(1)收集菌丝先在冷冻干燥机上充分抽干(24小时)抽干的菌丝体加液氮研磨成菌丝粉末;取菌株的干菌丝粉20~30mg(约2ml eppendorf的0.5处下)2ml eppendorf 离心管中,加DNA提取液500ul.振荡混匀。
(2)在上述混合液中加10%SDS 50ul将离心管横放在摇床(40~50-rpm37℃)中轻摇1小时。
(3)加5MNaCl溶液70ul轻摇,使溶液充分混匀。
(4)加10%的CTAB(10%的CTAB溶于0.7mNaCl中)65ul在65℃下水浴放置10~20分钟,期间需要轻摇数次。
(5)加700ul24:1氯仿:异戊醇在摇床(150 rpm)中5分钟离心(1000 rpm.10min)15℃区上清液装入新的1.5ml EP管中。
(6)加入450ul异丙醇(预冷),-20℃下放置1h以上。离心(10000rpm,12min),
再在-20℃下放置1h以上,离心(10000rpm,12min),收集沉淀。
(7)沉淀用70%乙醇漂洗2次,风干后沉淀溶于200ulTE缓冲液[10mMTris-HCl(PH7.5-8.0),1mMEDTA]中。此液即为DNA样品。该样品在-80℃下保存。
利用8个菌株DNA的混合样,从81个随机引物中初步筛选扩增条带较多的引物,结果显示大多数引物扩增的DNA 片段数目为1~ 6 条见(图3—2和图3—3), 从中选择带型清晰、重复性好的10个引物S1010、S1016、S1032、S1033、S1035、S1036、S1051、S1068、S1069、S1081扩增全部的供试菌株。


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