首先用磁性纳米材料(纳米氧化铁和纳米四氧化三铁)与3-氨基丙基三乙氧基硅烷相结合，得到的产物再用戊二醛试剂以共价键与蛋白酶相结合，得到磁性纳米固定化蛋白酶（即载体分别为纳米氧化铁和纳米四氧化三铁的固定化蛋白酶）。通过考马斯亮蓝染料结合比色法（Bradford法）来检测磁性纳米固定化蛋白酶固载率为多少，并进而比较两种固载化载体与蛋白酶的固载率的高低。
将按上述步骤得到的磁性纳米固定化蛋白酶，用布氏漏斗进行真空抽虑，在抽虑过程中用磷酸缓冲溶液进行充分润洗，在这个过程中，应该用永磁铁将磁性纳米固定化蛋白酶吸住，使其在抽虑的过程中仍留在烧杯中，只有其中含有的溶液进行抽虑。抽虑后，在滤纸上残留有白色的粉末物质，即为游离的蛋白酶。接着将得到的游离蛋白酶置于容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml（溶液1为从载体纳米氧化铁中抽虑出的物质定容的，溶液2为从载体纳米四氧化三铁中抽虑出来的物质定容的）。然后再称取100mg的蛋白酶置于容量瓶中，同样用蒸馏水定容至100ml（为溶液3），溶液4为蒸馏水，接着从溶液1、溶液2、溶液3和溶液4的上清液中各取10ml溶液，再将其分别置于100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，并接着按照表2的步骤进行磁性纳米固定化蛋白酶固载率的测定。
根据以上表格中的数据及计算结果，我们可以得出以下几点结论:(1)用磁性纳米氧化铁和磁性纳米四氧化三铁作为蛋白酶的固定化载体，能够成功的将蛋白酶固定化，且固载率都较高，实现了蛋白酶的重复利用[16]；(2)从固载率可以看出，用磁性纳米四氧化三铁作为蛋白酶的固定化的载体相对来说要比磁性纳米氧化铁好,固载率较高；（3）在实验过程中，在固定化载体量的一定的情况下，酶加多加少对固载率的影响很大，蛋白酶加入量为5mg后，固载率迅速下降，这是因为在载体饱和的情况下，随着自由酶加入量的增大，被固载酶没有变化的缘故，而在5mg之前，固载率稍有下降，原因是因为固载作用为共价单层吸收，已固载酶会对反应有抑制作用[15]。如图3所示。


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