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喜树发根培养及培养基中次生代谢产物的研究

作品编号:SWHX0004 开发环境: WORD全文:30页 论文字数:14500
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1.7 本课题研究的内容
本课题以树脂作为吸附材料,从喜树发根体系的培养基中富集喜树碱,现设想用富集能力最强的以及回收率最高且对发根体系继续生长影响最小的树脂富集培养基中的喜树碱,用不同浓度的乙醇对吸附后的树脂进行洗脱,回收富集喜树发根培养基中次生代谢产物喜树碱成分,用高效液相色谱方法检测富集的实验结果,并与标准图谱相比较确定所富集的产物。
2.1 喜树枝条不同组织及基本培养基的筛选
将外植体区分为叶片、顶芽、茎三种。叶片选择靠近顶芽、较小的叶片,切成0.5×0.5cm2左右大小的叶块,顶芽带一个侧芽,茎切成约1cm长带1个腋芽的茎段。分别接种于MS、40%MS两种培养基上,不添加植物生长调节剂。蔗糖浓度为3%,琼脂浓度为0.55%,pH5.8。培养40天统计结果,每处理重复3次。
从表1可以看出,茎段是最适宜的外植体,出芽率为29.27%(MS中),56.64%(40%MS中)。叶片完全不能被诱导出愈伤,顶芽有小部分能被诱导出愈伤,其中一小部分也能诱导出腋芽。叶片比较脆,很容易被损伤,一旦损伤,伤口就马上褐变,而且叶片密被细小柔毛,消毒效果很差,基本可分为两个极端:一是消毒彻底,但叶块完全丧失活力;一是活力保住了,但5天后就被污染了。因此选用叶片做外植体,消毒这一环节必须先做完善的试验,得出最好的消毒方式才能继续往下试验。两方面的原因可判定叶片很不适宜做外植体。
顶芽外植体也不适合做外植体。顶芽应是喜树生长力最旺盛的组织,但也是最幼嫩的部位,喜树组织越幼嫩的地方柔毛越密,因为其幼嫩,消毒过后,组织几乎都丧失活力,因此顶芽也不是外植体的最佳之选。
茎段相对比较光滑,半木质化,且带一个未萌发的腋芽,消毒难度相对较低,只要有适宜的培养基,腋芽很容易就能被诱导出来,愈伤也会很容易产生。
在MS和40%MS两种培养基中,置于40%MS中的顶芽及茎段的诱导效果是最好的。顶芽的萌芽率为30.70%,茎段的萌芽率为56.64%。40%MS培

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